ایک بار جن خلیوں میں ہم ثقافت کرتے ہیں۔

سیل فیکٹریآلودہ ہیں، ان میں سے اکثر کو سنبھالنا مشکل ہے۔اگر آلودہ خلیات قیمتی ہیں اور دوبارہ حاصل کرنا مشکل ہے تو انہیں ہٹانے کے لیے درج ذیل طریقے استعمال کیے جا سکتے ہیں۔

1. اینٹی بائیوٹکس استعمال کریں۔

اینٹی بائیوٹکس بیکٹیریا کو مارنے میں زیادہ موثر ہیں۔سیل فیکٹریاں.امتزاج دوائیں اکیلے دوائیوں سے زیادہ موثر ہیں۔روک تھام کی دوائیں آلودگی کے بعد دوائیوں سے زیادہ موثر ہیں۔احتیاطی دوائیں عام طور پر ڈبل اینٹی بائیوٹک استعمال کرتی ہیں (پینسلین 100u/mL علاوہ streptomycin 100μg/mL)۔آلودگی کے بعد، صفائی کا طریقہ معمول کی مقدار سے 5 سے 10 گنا زیادہ ہونا چاہیے۔منشیات کو شامل کرنے کے بعد 24 سے 48 گھنٹوں تک استعمال کیا جانا چاہئے، اور پھر معمول کے ساتھ تبدیل کیا جانا چاہئے.ثقافتی سیال۔یہ طریقہ آلودگی کے ابتدائی مراحل میں کارآمد ثابت ہو سکتا ہے۔پینسلن اور اسٹریپٹومائسن کے علاوہ، استعمال ہونے والی اینٹی بائیوٹکس میں gentamicin، kanamycin، polymyxin، tetracycline، nystatin، وغیرہ بھی شامل ہو سکتے ہیں۔ عام طور پر استعمال ہونے والی 400 سے 800 μg/mL کنامیسن یا 200 μg/mL ٹیٹراسائکلین ہیں۔میڈیم ہر 2 سے 3 دن میں تبدیل کیا جاتا ہے اور علاج کے لیے 1 سے 2 نسلوں تک منتقل ہوتا ہے۔حالیہ برسوں میں، یہ اطلاع دی گئی ہے کہ 4-fluoro، 2-hydroxyquinoline (Ciprofloxacin, Cip), Pleu-romutilin derivative (Pleu-romutilin derivative, BM-Cyclin2: BM-1 اور tetracycline derivative (BM-2)) اینٹی بائیوٹک ہیں۔ اکیلے یا مجموعہ میں استعمال ہونے پر مائکوپلاسما کو مارنے میں مؤثر۔یہ تینوں اینٹی بائیوٹکس PBS میں 250X مرتکز محلول میں تیار کی جاتی ہیں اور بعد میں استعمال کے لیے -20°C پر محفوظ کی جاتی ہیں۔استعمال کا ارتکاز Cip 10 μg/mL ہے، BM-1 10 μg/mL ہے، اور BM-2 5μg/mL ہے۔استعمال کرتے وقت، پہلے آلودہ کلچر میڈیم کو ایسپریٹ کریں، BM-1 پر مشتمل RPMI1640 کلچر میڈیم شامل کریں، پھر 3 دن کے بعد کلچر میڈیم کو ایسپریٹ کریں، BM-2 پر مشتمل RPMI1640 کلچر میڈیم شامل کریں، اور کلچر کو 4 دن تک شامل کریں، اور اسی طرح لگاتار 3 دن تک۔ .راؤنڈز، جب تک کہ 33258 فلوروسینٹ سٹیننگ مائیکروسکوپی سے یہ ثابت نہ ہو جائے کہ مائکوپلاسما کو ختم کر دیا گیا ہے، تب تک کلچر اور گزرنے کے لیے نارمل کلچر میڈیم 3-4 بار شامل کیا جاتا ہے۔

2. حرارتی علاج

آلودہ ٹشو کلچر کو 41 ° C پر 18 گھنٹے تک انکیوبیٹ کرنا مائکوپلاسما کو مار سکتا ہے، لیکن خلیات پر اس کے منفی اثرات مرتب ہوتے ہیں۔لہٰذا، علاج سے پہلے ایک ابتدائی ٹیسٹ کرایا جانا چاہیے تاکہ حرارت کے وقت کا پتہ لگایا جا سکے جو زیادہ سے زیادہ حد تک مائکوپلاسما کو مار سکتا ہے اور خلیوں پر کم سے کم اثر ڈال سکتا ہے۔یہ طریقہ بعض اوقات ناقابل اعتبار ہوتا ہے۔اگر پہلے دوائیوں سے علاج کیا جائے اور پھر 41 ° C پر گرم کیا جائے تو اثر بہتر ہوگا۔

3. mycoplasma مخصوص سیرم استعمال کریں۔

مائکوپلاسما کی آلودگی کو 5% خرگوش مائکوپلاسما امیون سیرم (ہیماگلوٹینیشن ٹائٹر 1:320 یا اس سے اوپر) سے دور کیا جا سکتا ہے۔چونکہ مخصوص اینٹی باڈی مائکوپلاسما کی نشوونما کو روک سکتی ہے، یہ اینٹی سیرم کے علاج کے 11 دن بعد منفی ہو جاتی ہے اور 5 ماہ بعد منفی رہتی ہے۔منفی ہے.تاہم، یہ طریقہ زیادہ تکلیف دہ ہے اور اتنا آسان اور اقتصادی نہیں جتنا کہ اینٹی بائیوٹکس استعمال کرنا ہے۔

4. دوسرے طریقے

آلودگی کو دور کرنے کے مذکورہ بالا طریقوں کے علاوہ، جانوروں میں ٹیکہ لگانے اور نس بندی کے طریقے، میکروفیج فاگوسائٹوسس کے طریقے، آلودہ میں بروموراسل شامل کرنے کے طریقے۔ثقافت کی بوتلیںاور پھر ان کو روشنی، اور فلٹریشن کے طریقے وغیرہ سے شعاع لگانا، لیکن یہ سب زیادہ پریشان کن اور غیر موثر ہیں۔لہذا، ایک بار جب مائکوپلاسما کی آلودگی واقع ہو جاتی ہے، جب تک کہ یہ خاص اہمیت کا حامل نہ ہو، اسے عام طور پر ضائع کر دیا جاتا ہے اور دوبارہ کلچر کیا جاتا ہے۔

براہ کرم واٹس ایپ اور وی چیٹ سے رابطہ کریں: +86 180 8048 1709